电化学发光法检测叶酸代Folate

摘要

目的

通过cobase电化学免疫分析仪对叶酸Ⅲ代（FolateⅢ）试剂进行方法学评价和性能验证。

方法

采用电化学发光法对FolateⅢ的不精密度、线性分析、回收实验、溶血实验等性能进行评价。

结果

在检测范围内，低、高值样本批内不精密度分别为4.29%和4.25%，批间不精密度分别为3.60%和3.59%；线性分析的稀释健全性良好，R2=0.；平均回收率为97.83%；标本溶血会使检测结果升高,具有统计学差异（P0.05）。

结论

罗氏诊断电化学发光法检测FolateⅢ试剂方法可靠、检测性能良好，符合临床实验室要求，可广泛开展使用。

关键词

叶酸Ⅲ代；电化学发光法；方法学评价

叶酸（Folate）也叫维生素B9或蝶酰谷氨酸（pteroylglutamicacid，PGA），是一种水溶性维生素。叶酸是人体在利用糖分和氨基酸时的必要物质，是机体细胞生长和繁殖所必需的物质。在体内叶酸以四氢叶酸的形式起作用，四氢叶酸在体内参与嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和转化。叶酸帮助蛋白质的代谢，并与维生素B12共同促进红细胞的生成和成熟，是制造红血球不可缺少的物质。叶酸对细胞的分裂生长及核酸、氨基酸、蛋白质的合成起着重要的作用。人体缺少叶酸可导致红血球的异常，未成熟细胞的增加，贫血以及白血球减少。叶酸是胎儿生长发育不可缺少的营养素。孕妇缺乏叶酸有可能导致胎儿出生时出现低体重、唇腭裂、心脏缺陷等。如果在怀孕头3个月内缺乏叶酸，可引起胎儿神经管发育缺陷，而导致畸形。罗氏最新一代的FOLⅢ代试剂，溯源性变更为WHO03/。

材料与方法

01材料

1.1医院就诊患者中选取所需要浓度的样本，按照实验室静脉采血操作流程，清晨空腹抽血，rpm离心7分钟分离血清，立刻进行检测。

1.2仪器Rochecobase电化学免疫分析仪。

1.3试剂Roche新一代叶酸检测试剂盒及相应的标准品和质控品。

02方法

2.1不精密度实验[1][2]选取高、低值混合血清样本各一份，连续测定20次，另每天上午测定1次，连续测定20天，分别计算测定值的均值（x）、标准差（s）及变异系数变异系数（CV%）。

2.2线性分析[3]选取高值和低值血清样本各1份，按0/5，1/4，2/3，3/2，4/1，5/0的比例进行混合后，上机进行检测，比较检测值与理论值的相关性。

2.3回收实验[4]选取血清质量较好，无溶血、乳糜、黄疸等干扰因素的高值（16.6ng/ml）和低值（1.19ng/mL）血清样本各1份，按1/5，2/4，3/3，4/2，5/1的比例进行混合后，上机进行检测，算出理论FolateⅢ的浓度，比较实际检测值和计算理论值的相关性，计算回收率。

2.4溶血实验选取无干扰（无溶血、乳糜、黄疸）的血清标本15份，检测记录其数值，然后人为使其溶血，上机检测其浓度值，得出检测结果，计算两组数据的相关性。

2.5统计学处理实验数据以平均值±标准差（x±s）表示，组间比较采用非参数检验。应用SPSS22.0软件对实验数据进行统计分析，以P0.05为有统计学差异。

结果

01不精密度实验

电化学发光法检测FolateⅢ，批内及批间CV%均小于5%，不精密度良好。结果见表1。

表1电化学发光法检测FolateⅢ不精密度实验结果（x±s，CV%）

02线性分析

线性方程为y=1.x-0.，R2=0.，线性良好。结果见图1。

图1电化学发光法检测FolateⅢ线性分析

03回收实验

将高、低值血清样本按比例混合后上机检测，比较实际检测值和理论值的差异性，

计算平均回收率为97.83%（回收率=检测值/理论值×%）。结果见表2。

表2电化学发光法检测FolateⅢ回收实验

04溶血实验

比较同一组标本溶血前与溶血后两组数据，P0.05，具有统计学差异，溶血对标本检测有影响。结果见表3。

表3电化学发光法检测FolateⅢ的溶血实验

讨论

含叶酸的食物很多，但由于叶酸遇光、遇热不稳定，容易失去活性，所以人体真正能从食物中获得的叶酸并不多。盐水浸泡过的蔬菜，叶酸的成份也会损失很大。因此，人们要改变一些烹制习惯，尽可能减少叶酸流失，还要加强富含叶酸食物的摄入。天然叶酸生物利用度较低，在45%左右。合成的叶酸在数月或数年内可保持稳定，容易吸收且人体利用度高，约高出天然制品的一倍左右。

叶酸缺乏时，脱氧胸苷酸，嘌呤核苷酸的形式及氨基酸的互变受阻，细胞内DNA合成减少，细胞的分裂成熟发生障碍。叶酸缺乏的临床为巨幼细胞性贫血、白细胞和血小板减少，以及消化道症状如食欲减退、腹胀、腹泻及舌炎等，以舌炎最为突出，舌质红、舌乳头萎缩、表面光滑，俗称“牛肉舌”，伴疼痛。孕妇缺乏叶酸，可使先兆子痫、胎盘剥离的发生率增高，患有巨幼红细胞贫血的孕妇易出现胎儿宫内发育迟缓、早产及新生儿低出生体重。怀孕早期缺乏叶酸，还易引起胎儿神经管畸形（如脊柱裂、无脑畸形等）。叶酸缺乏可引起高同型半胱氨酸血症，从而增加心血管病的危险性。

检测系统或检测方法进行性能评价是临床检验质量管理的重要内容，不精密度是反映检测系统整体性能的首要指标，也是进行其他方法学验证实验的前提。电化学发光免疫分析法（ECLIA）检测血清FolateⅢ通过封闭的检测系统，即被检测项目的试剂、定标品、质控和耗材均来自罗氏诊断，为实验结果的高精密度提供了可靠保证。经本实验验证，该试剂盒在不精密度、线性、回收、溶血等方面性能均良好。电化学发光法检测血清FolateⅢ可作为叶酸贫血症和优生监测的敏感和特异性指标，具有特异性强、灵敏度高，可实时监测等优势，可广泛应用于临床。

参考文献：

[1]刘兰民，李德琴等．RocheModularP检测缺血修饰清蛋白的方法学评价．

国际检验医学杂志，，36（20）：-

[2]董振南，杨秋亮等．人附睾蛋白4检测试剂方法学评价．

解放军医学院学报，，34（7）：-

[3]向阳，姜艳等．没法检测血清游离脂肪酸的方法学评价，

新疆医科大学学报，，38（11）：-．

[4]侯晓峰，李娟，郭广宏．硫氰酸胍抑制法测定乳酸脱氢酶同工酶1的方法学评价．

标记免疫分析与临床，，22（8）：-．

文章来源：罗氏诊断DiaLog

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长按







































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